欧宝平台:传统的支原体检测方法
发布时间:2022-05-26 14:36:32
产品型号:染色机
产品简介:  支原体对细胞培养会带来严重的危害,同时,它的发生率较高,肉眼不易察觉。有报道,在细胞培养室中,它的平均发生率甚至可高达63%。在生物制品中,它的发生率为1%~3%。  方法一:培养法。直接将待测样
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  支原体对细胞培养会带来严重的危害,同时,它的发生率较高,肉眼不易察觉。有报道,在细胞培养室中,它的平均发生率甚至可高达63%。在生物制品中,它的发生率为1%~3%。

  方法一:培养法。直接将待测样品涂布在支原体液体或固体培养基上,让其生长,一般需要数周,才能看到菌液变浑浊或有菌落长出。 培养法是支原体检测最经典的方法,其优点是:灵敏度适中和结果可靠。但是培养法的一个主要缺点是时间周期太长,不适合作为细胞污染的快速检测方法。

  方法二:DNA的荧光染色法。荧光染剂(如Hoechst 33258,DAPI)可以结合到细胞和支原体的DNA。被支原体污染的细胞经染色后,如果在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点,即为支原体的DNA,则证明有支原体之污染。该法相对培养法快速,但是灵敏度较差。当用荧光染色法发现有支原体后,支原体的清除相对就较困难。

  方法三:扫描电镜法。将细胞样品进行扫描电镜拍照,如果被支原体污染可以在细胞表面看到密密麻麻的小颗粒。该方法由于要使用电子显微镜,不适合用作实验室常规检测。

  方法四:PCR法。PCR法相对较快,灵敏度也较高。是目前实验室最常用的支原体检测方法。但是PCR法也有自己的致命缺点:细胞培养液上清常含有强烈抑制PCR扩增的代谢产物。因为很多研究人员直接使用细胞培养液上清原液进行PCR检测,如果检测为阴性就认为没有支原体污染。其实,还有一种可能性,就是PCR的扩增被细胞的代谢产物抑制了,而不是没有支原体污染!

  通常来说,被污染的细胞应该丢弃,以避免成为污染源。但对于珍贵的细胞,以往别的品牌的支原体清除剂,其实只是抑制剂,它们抑制支原体的DNA合成和蛋白合成,但无法杀除。Mynox®它提取自枯草杆菌,可与支原体膜特异性结合,破坏膜通透性,导致支原体膨胀破裂而死。使用Mynox®一般在2-3个小时即可完成清除任务。

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